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Thermo Pierce磁性RNA-蛋白Pull-Down試劑盒20164

Thermo Scientific Pierce 磁性 RNA-蛋白沉降試劑盒為研究人員提供了一種簡(jiǎn)化、穩(wěn)健的方法，使用末端標(biāo)記 RNA 作為誘餌來富集蛋白-RNA 相互作用。

磁性 RNA-蛋白沉降試劑盒的特點(diǎn)：

•直接 – 使用末端標(biāo)記 RNA 直接捕獲核糖核蛋白復(fù)合物；沉降時(shí)不使用或不需要抗體
•易于使用– 富集 RBP 時(shí)不需要使用離心杯或離心；簡(jiǎn)化了程序，完成 RNA 標(biāo)記反應(yīng)后僅需極少的手動(dòng)操作時(shí)間（小于 3 小時(shí)）
•靈活– 使用體外轉(zhuǎn)錄 RNA 或合成 RNA 進(jìn)行各種長度和復(fù)雜性的標(biāo)記；使用內(nèi)源性、過表達(dá)和體外翻譯裂解物成功富集的蛋白
•特異性– 磁珠背景噪音低；無關(guān) RNA 或突變 RNA 不會(huì)顯著影響特定 RBP 的富集
•經(jīng)濟(jì)– 價(jià)低于單獨(dú)購買商業(yè)合成的末端標(biāo)記 RNA、磁珠和試劑
•全套– 含有標(biāo)記模塊和富集模塊，模塊中帶有檢測(cè)所需的緩沖液；包括陽性對(duì)照 RNA、陰性對(duì)照 RNA 以及 RBP 抗體

磁性 RNA-蛋白沉降試劑盒提供了使用以脫硫生物su末端標(biāo)記的 RNA 高效富集 RNA 結(jié)合蛋白 (RBP) 的試劑以及鏈霉su親和素磁珠。全套試劑盒中包含的試劑足夠進(jìn)行 20 次 RNA 標(biāo)記反應(yīng)和 20 次蛋白-RNA 沉降分析。這種直接富集蛋白-RNA 相互作用的方法可以替代蛋白-RNA 復(fù)合體或核酸嵌入蛋白的抗體捕獲法。本試劑盒的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是，它為標(biāo)記反應(yīng)和沉降分析均提供了經(jīng)驗(yàn)證的質(zhì)控品。該試劑盒適于進(jìn)行多種下游應(yīng)用，包括 Western 印跡和質(zhì)譜 (MS)。

包括：
全套試劑盒中包含 Pierce RNA 3'-端脫硫生物su化試劑盒、陽性和陰性 RNA 對(duì)照品、核酸兼容性鏈霉su親和素磁珠以及 RBP 富集和洗脫緩沖液

需要：
用戶提供的 RNA 和裂解物（實(shí)驗(yàn)樣品）

應(yīng)用：
• 突變分析
• 結(jié)構(gòu)功能分析
• RNA 與蛋白相互作用的鑒別
• 未知 RNA:蛋白結(jié)合對(duì)或復(fù)合物的 MS 分析

使用標(biāo)記 RNA 作為誘餌來富集 RNA-結(jié)合蛋白優(yōu)于抗體富集，因?yàn)槠渲苯硬东@相互作用。本試劑盒中包括 Pierce RNA 3'-末端脫硫生物su化試劑盒，其使用 T4 RNA 連接酶將單個(gè)胞苷二磷酸核苷酸連接至單鏈 RNA 的 3'-末端。脫硫生物su既可用作檢測(cè)靶標(biāo)，也可用作可洗脫親和柄。核苷酸與脫硫生物su之間的間隔臂長度已經(jīng)過優(yōu)化處理，可高效連接至微珠上，而不會(huì)阻礙 RNA 與蛋白的結(jié)合。

RNA 結(jié)合蛋白富集的程序已經(jīng)過優(yōu)化，易于使用。先將標(biāo)記好的 RNA 捕獲到微珠上，以作好結(jié)合蛋白的準(zhǔn)備。將結(jié)合了 RNA 的微珠放入蛋白 RNA 結(jié)合緩沖液中進(jìn)行平衡，然后加入蛋白裂解物。洗滌之后，使用非變性生物su洗脫緩沖液或 SDS-PAGE 上樣緩沖液洗脫樣品。洗脫后的樣品即可進(jìn)行各種下游操作，包括 Western 印跡或質(zhì)譜分析。

沉降檢測(cè)的控制系統(tǒng)包括雄激素受體 (AR) RNA 的 3'-非翻譯區(qū)、poly(A)25 RNA 以及哺乳動(dòng)物細(xì)胞裂解物。雄激素受體 RNA 的近端 3'-非翻譯區(qū) (UTR) 中包含多個(gè)富含 UC 的區(qū)域，可結(jié)合 HuR 以及 Poly(C) 結(jié)合蛋白質(zhì)（CP1 和 CP2）。這些 RNA 結(jié)合蛋白可調(diào)節(jié) mRNA 的穩(wěn)定性 (HuR) 以及 mRNA 的代謝和翻譯（CP1 和 CP2）。陰性對(duì)照 RNA 和 poly(A)25 RNA 中并不包含 HuR 或 poly(C) BP 的結(jié)合位點(diǎn)。

Thermo Pierce磁性RNA-蛋白Pull-Down試劑盒20164